Caracterizacion inmunobiologica de la leucemia murina LB y la linea celular LBC / Immunobiological characterization of the murine LB leukemia and the LBC cell line

El tumor LB se originó como una leucemia linfoide de origen espontáneo. No es inmunogénico y crece rápidamente en el huésped singeneico infiltrando hígado, bazo y ganglíos linfáticos. A partir del tumor original se obtuvo la línea en cultivo LBC, que crece en suspensión, no requiere del agregado de factores de crecimiento y presenta un número modal de cromosomas igual al patrón normal de ratón. La caracterización fenotípica de las células LB y de la línea en cultivo demostró que ambos tipos celulares están constituídos por linfocitos T, CD3-, CD25+, gp 70-, J22d.2+, que expresan antígenos del CMH de clase I pero no de clase II, CD8+, y CD4- en el tumor original pero CD4+ en la línea celular. Esta última fue capaz de inducir una respuesta inmune en el huésped singeneico, mediada por anticuerpos que reaccionaron contra componentesde peso molecular 14, 16 y 27 kDa presentes en las células tumorales y en timocitos pero no en ganglios normales, y por células citotóxicas, efectivas para retardar el tiempo de muerte de los ratones desafiados con el tumor original LB. Por ELISA se pudo comprobar la presencia de receptor soluble de IL-2 en los sueros, ascitis y sobrenadantes de células LB en cultivo, responsable del efecto inhibitorio de la proliferación tumoral. Las células fueron estimuladas por agregado de IL-2 e inhibidas en presencia de un anticuerpo monoclonal específico para IL-2, demostrando la funcionalidad del receptor. Por RT-PCR se puso en evidencia la presencia de ARNn de IL-2 en las células tumorales, confirmando que éstas sintetizan IL-2. Se realizó una triple transfección de las células LBC con los genes que codificam para las cadenas alpha y beta de las moléculas I-A(d) y el gen pSV2-Neo, que confiere resistência al antibiótico Genetecín, y se obtuvieron 3 clones positivos para I-A(d). Por inoculación de estas células se generaron linfocitos T citotóxicos que fueron efectivos para impedir o retrasar significativamente el desarrollo tumoral. En función de estos resultados postulamos que la expresión de antígenos de clase II sobre la superfície celular le confiere a la célula tumoral la capacidad para actuar como célula presentadora de antígenos, generando una respuesta anti-tumoral más eficiente.

Empleo del dot-enzimoinmunoensayo en la valoración de la proteína A de Staphylococcus aureus / Dot-immunobinding assay use in valoration of protein A from Staphylococcus aureus

Se describe un método inmunoenzimático, que, por su gran sensibilidad, permite detectar pequeñas cantidades de proteína A presente en la membrana celular de determinadas cepas de Staphylococcus aureus o la liberada en el medio de cultivo. Esta técnica del dot-enzimoinmunoensayo permite poner en evidencia concentraciones de hasta 0,115 ug.ml-1 de proteína. Comparando los resultados obtenidos con la técnica de inmunodifusión radial, se confirma su mayor sensibilidad y la posibilidad de utilizar un método específico y de fácil realización en el dosaje de proteína A.

Marcadores de superficie y factores humorales en una leucemia murina espontánea / Surface markers and humoral factors in a spontaneous murine leukemia

Se presenta un modelo de linfoma espontáneo en ratones BALB/c que por sus características es apropiado para el estudio de las interacciones entre el tumor y el sistema inmune. La caracterización de las células tumorales se realizó por FACS hecho que permitió determinar que el tumor está constituído por linfocitos T que no expresan proteínas virales gp70 en su membrana y que llevan marcadores de células colaboradoras (CD4) y supresoras (CD8). Además, expresan el receptor para IL-2 y antígenos del complejo mayor de histocompatibilidad de clase I pero no de clase II. No se encuentran anticuerpos en el suero ni en el líquido ascítico de los ratones portadores del tumor (transplante síngeneico); se pudo determinar en estos fluídos la presencia de un factor supresor que inhibió la proliferación de las células tumorales in vitro sí como la respuesta linfoproliferativa a Concavalina A de esplenocitos normales. Los resultados permiten concluir que este modelo experimental puede ser utilizado para el estudio y caracterización de citoquinas que podrían ser responsables del estado de inmunosupresión que se observa en ciertos pacientes con cáncer

Lack of specifici immune response against a spontaneous mouse lymphoma

Se estudió la respuesta inmune inducida por células tumorales, o por extractos de membranas de células tumorales, y la presencia de anticuerpos en el suero de ratones portadores de tumor en un modelo murino. Se demostró la ausencia de anticuerpos en el suero de ratones portadores de tumor. Las células tratadas con Mitomicina C, los extractos de membranas tumorales (TME) y fracciones obtenidos de los mismos (fracción 2) indujeron bajos títulos de anticuerpos específicos cuando se inyectaron en huéspedes singeneicos, mientras que los homogenatos totales de tumor y otras fracciones fueron inefectivas. Los ensayos hechos "in vivo" demostraron que los anticuerpos inducidos no protegían contra las células LB vivas ya que no alteraron el crecimciento del tumor